Evaluation of the immunogenicity of Schistosoma mansoni egg surface

Abstract INTRODUCTION Immunogenicity of Schistosoma mansoni egg surface was examined to determine whether intact eggshells have lower antigenicity than ruptured eggs. METHODS: Swiss Webster mice were inoculated with intact or ultrasonicated S. mansoni eggs isolated from infected human feces. Mice were separated into four groups of six animals each and immunizations were performed approximately every 20 days during a 60-day period. Groups 1-4 were administered with saline solution, sonicated eggs with Freund's adjuvant, sonicated eggs without Freund's adjuvant, and intact eggs, respectively. IgG humoral immune response was assessed by ELISA using Soluble Egg Antigen produced from eggs isolated from the livers of infected mice. RESULTS Sonicated eggs co-administered with adjuvant induced the highest humoral response at 58 days, which was 11.9-fold (95% CI 6.2-17.5) greater than the response induced by saline solution. Sonicated eggs without adjuvant induced a 4.3-fold stronger response (95% CI 2.4-6.2) than normal saline. Intact eggs induced humoral response that was nominally twice stronger (95% CI 0.8-3.2) than that induced by normal saline but the effect did not reach statistical significance. CONCLUSIONS Soluble antigens are not abundant on the surface of S. mansoni eggs and/or are not secreted in sufficient quantities to induce a significant immune response to intact eggs. Assuming that isolation procedures had not damaged the eggs used for inoculation, our observations suggest that intact eggs either do not induce a significant immune response or, if they do, the mechanism involves insoluble antigens from the egg surface.

Cultura de células de tecidos de Biomphalaria tenagophila (Orbigny, 1835) e Biomphalaria glabrata (Say, 1918) como ferramenta no estudo das interações entre hospedeiro invertebrado e Schistosoma mansoni (Sambom, 1907)

A esquistossomose mansoni é uma doença endêmica no Brasil, causada pelo trematódeo digeneico Schistosoma mansoni. Em seu ciclo de vida, o parasito tem uma passagem obrigatória por caramujos do gênero Biomphalaria, hospedeiros invertebrados que ocupam papel central no processo de transmissão da doença. O estudo da interação entre parasito-hospedeiro invertebrado vem se desenvolvendo ao longo dos anos, entretanto sem solucionar a carência de modelos in vitro que simulem a infecção. As células Bge, modelo estabelecido para se estudar a interação, não estão mais disponíveis nos bancos de células comerciais, restando apenas modelos celulares de curta duração. Com o objetivo de explorar novas ferramentas no estudo das interações parasito-hospedeiro invertebrado em esquistossomose, realizamos o presente estudo que estabeleceu, caracterizou e explorou a funcionalidade de culturas celulares primárias de espécimes adultos de Biomphalaria como modelos na interação in vitro com esporocistos de S. mansoni. Foram utilizadas duas espécies de caramujos, Biomphalaria glabrata, como modelo susceptível à infecção por S. mansoni, e Biomphalaria tenagophila Taim, como modelo de resistência absoluta à infecção por este mesmo parasito. Baseados em características ultraestruturais das células em culturas primárias derivadas de diversos tecidos, selecionamos as células derivadas da glândula digestiva e do tubo renal sacular para os ensaios de interação com o parasito

As culturas celulares derivadas da glândula digestiva de B. tenagophila Taim foram capazes de matar, in vitro, esporocistos primários de S. mansoni. As culturas primárias derivadas do tubo renal sacular dessa mesma linhagem, e as culturas homólogas de B. glabrata, dos dois tecidos, não apresentaram esta atividade letal em ensaios in vitro. Para acompanhamento de possíveis alterações moleculares nas culturas celulares após interação com o parasito, utilizamos a expressão do transcrito aif, estimulador da atividade e proliferação de hemócitos, como indicador. Após a interação, a expressão de aif foi aumentada, somente nas células derivadas da glândula digestiva de B. tenagophila Taim, corroborando os resultados anteriores

A análise ultraestrutural das células das culturas testadas mostrou que, dentre as células derivadas da glândula digestiva, há um perfil de hemócitos tipo-granulócitos diferentes dos hemócitos tipo-granulócitos circulantes. O perfil ultraestrutural de células derivadas do tubo renal sacular apresentaram semelhança com o obtido, anteriormente, para células do órgão produtor de hemócitos (APO). No entanto, os testes de atividade sugerem que, apesar das semelhanças, tratam-se de culturas distintas. Para a obtenção de modelos não senescentes, foi realizada a tentativa de imortalização das culturas de células derivadas do tubo renal sacular de B. tenagophila Taim, através da introdução do gene da telomerase transcriptase reversa. Entretanto as tentativas de imortalização dos modelos analisados foram ineficazes, com dificuldades na obtenção de culturas livres de contaminantes biológicos e ausência de proliferação celular. O presente trabalho mostra, pela primeira vez, a ação letal de hemócitos presentes na glândula digestiva de caramujos B. tenagophila linhagem Taim contra esporocistos de S. mansoni. A prioridade para continuação da linha de pesquisas aponta para novas tentativas de imortalização visando a obtenção de uma nova ferramenta para o estudo da interação Biomphalaria/S. mansoni

Perfil das células T Natural Killer (NKT)de indivíduos asmáticos desafiadas com antígenos solúvel do ovo de schistosoma mansoni / Natural Killer T cell (NKT) profile of asthmatic individuals challenged with soluble schistosoma mansoni egg antigens

INTRODUÇÃO: A asma é uma doença inflamatória crônica, caracterizada por hiper-reatividade das vias aéreas inferiores e por limitação variável e reversível ao fluxo aéreo. Apresenta manifestações clínicas na forma de sibilância, dispneia, sensação de aperto no peito e tosse, podendo ser considerada como atópica ou não atópica, de acordo com seus aspectos imunopatogênicos. Células do sistema imune, como neutrófilos, macrófagos, células dendríticas e as células T Natural Killer (NKT), apresentam importante papel no desenvolvimento ou regulação da resposta inflamatória da asma. Desta forma é possível que antígenos com propriedades regulatórias, como no caso dos antígenos de ovo do Schistosoma mansoni (SEA), sejam capazes de alterar o perfil destas células e regular a resposta imune da asma. OBJETIVOS: Avaliar a frequência de NKT e expressão de moléculas de ativação e coestimulação, além de citocinas nestas células, em indivíduos com asma. METODOLOGIA: Trata-se de um estudo de corte transversal realizado com 24 voluntários, sendo 14 indivíduos asmáticos e 10 voluntários não asmáticos. Células mononucleares de sangue periférico (PNMC)...

INTRODUCTION: Asthma is a chronic inflammatory disease characterized by hyperreactivity of lower airways and variable limitation and reversible airflow. The main clinical manifestations are wheezing, breathlessness, chest pain that feel like tightness and coughing, being considered as atopic or non-atopic, according to its immunopathogenic aspect. Immune cells, such as neutrophils, macrophages, dendritic cells and Natural Killer T cells (NKT) play an important role in the regulation or development of inflammatory response of asthma. Thus, it is possible that antigens with regulatory properties, such as Schistosoma mansoni soluble egg antigen (SEA), are able to alter the profile of these cells and regulate the immune response of asthma. AIM: To evaluate the frequency of NKT cells, expression of activation and costimulatory markers, as well as cytokine expression in NKT cells from individuals with asthma. METHODOLOGY: This is a cross-sectional study of 24 volunteers, of which 14 were asthmatic and 10 nonasthmatic volunteers. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC)...

Caracterização da maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em Biomphalaria glabrata e o efeito da infecção por Schistosoma mansoni no processo

A Organização Mundial de Saúde estima que cerca de 240 milhões de pessoas, em 78 países, necessitam de tratamento para esquistossomose, uma doença crônica causada por trematódeos do gênero Schistosoma. No Brasil, o Schistosoma mansoni é o único representante deste gênero, cuja passagem pelo hospedeiro invertebrado, caramujos do gênero Biomphalaria, é obrigatória antes de infectar um hospedeiro mamífero, entre eles o homem. A interação parasito-hospedeiro invertebrado é complexa, podendo o grau de susceptibilidade do caramujo à infecção variar desde extremamente permissivo até completamente resistente. Com o genoma e transcriptoma de B. glabrata disponíveis, o estudo de genes relacionados à regulação da expressão gênica, principalmente aqueles responsáveis pela maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs poderão auxiliar no entendimento da biologia do vetor B. glabrata bem como sua relação como o parasito S. mansoni. Alguns aspectos da interação parasito-hospedeiro invertebrado continuam pouco explorados, incluindo a participação dos pequenos RNAs não codificadores de proteínas como miRNAs, siRNAs e piRNAs. Utilizando ferramentas de bioinformática ePCR quantitativa, buscamos identificar e caracterizar a maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em B. glabrata.

Nosso trabalho demonstra que a maquinaria necessária para o processamento destas moléculas está ativa em B. glabrata com expressão gênica diferencial dos genes Argonauta, Drosha, Piwi, Exportina 5 e Tudor em diferentes estágios de desenvolvimento do animal bem como durante a infecção pelo S. mansoni. As análises de bioinformática utilizadas nesse trabalho mostraram a alta conservação dos genes envolvidos na maquinaria de miRNAs e piRNAs utilizando análise e distribuição de domínios conservados, análise de resíduos do sítio catalítico bem como análise filogenética. Estes dados sugerem que a maquinaria de silenciamento mediada por miRNAs e piRNAs interferem na biologia do caramujo durante todo o seu ciclo de vida, além de contribuir, de maneira ainda indefinida, na relação B. glabrata/S. mansoni. Estudos mais detalhados necessitarão ser realizados para confirmar a participação das preditas proteínas da via de miRNAs e piRNAs na relação parasito/hospedeiro, principalmente sua participação efetiva em seus genes alvos, uma vez que o parasito S. mansoni não possui expressa a via de piRNAs em seu genoma.

Avaliação da imunoproteção induzida pelas proteínas recombinantes Sm29 e Sm22.6 de Schistosoma mansoni em camundongos primoinfectados e tratados

O desenvolvimento de uma vacina para a esquistossomose, juntamente com a quimioterapia, seria de grande impacto para o controle e eliminação da doença. Nesse sentido, vários antígenos do parasito já foram testados a fim de avaliar a capacidade dos mesmos em induzirem proteção contra a infecção pelo Schistosoma mansoni. Porém, apesar de alguns antígenos apresentarem bons resultados na proteção contra a infecção, esses nunca foram testados em modelos experimentais previamente expostos a antígenos do parasito. No caso da esquistossomose, isso seria importante já que os moradores de áreas endêmicas, população alvo de uma vacina para a doença, passam por repetidas infecções ao longo de suas vidas. Diante dessa necessidade, duas proteínas de tegumento de Schistosoma mansoni, Sm22.6 e Sm29, merecem destaque já que têm sido associadas à resistência à infecção e reinfeção em moradores de áreas endêmicas, e por terem induzido proteção parcial em ensaios envolvendo a imunização de camundongos C57BL/6 naïve. Portanto, este trabalho objetivou avaliar a habilidade das proteínas recombinantes, Sm22.6 e Sm29, em induzirem proteção em animais BALB/c que já tenham sido previamente infectados e tratados. Nós também avaliamos a capacidade das proteínas Sm22.6r e Sm29r em induzirem proteção em camundongos BALB/c naïve, já que nos trabalhos anteriores essas foram testadas em animais da linhagem C57BL/6.

Nossos resultados demonstraram que, diferentemente dos trabalhos anteriores, a imunização de animais BALB/c naïve com Sm22.6r ou Sm29r não foi capaz de induzir proteção. Apesar disso, através de um ensaio de imunofluorescência, foi possível observar que os anticorpos produzidos, em resposta à imunização com Sm22.6r ou Sm29r, foram capazes de reconhecer a forma nativa dessas proteínas, na superfície do parasito. A imunização de animais, infectados e tratados, com Sm22.6r+Freund, embora tenha desencadeado uma resposta imune robusta, também não foi capaz de conferir imunidade protetora. Por outro lado, camundongos, infectados/tratados, imunizados com Sm29r+Freund apresentaram significativa redução da carga parasitária (proteção de 26%-48%) após três doses da vacina. Esta formulação vacinal induziu uma produção significativa das citocinas IL-2, IFN-γ, IL-17 e IL-4; uma resposta humoral vigorosa com produção de IgG, IgG1, IgG2a e IgE específicos; e um aumento significativo no percentual de células TCD4+ de memória central. Os adjuvantes Alum e MPL também foram formulados juntamente com a Sm29r. Os resultados demonstraram que somente a formulação vacinal Sm29r+Alum foi capaz de conferir proteção (29%-37%), desencadeando uma produção significativa de IL-2, IL-17 e IL-10, e um aumento do percentual de células TCD4+ produtoras de IFN-γ. Além disso, esses animais apresentaram níveis significativos de anticorpos específicos IgG, IgG1, IgG2a e IgE e um aumento significativo no percentual de células B de memória. Nossos resultados confirmam o papel imunoprotetor da proteína Sm29r, reforçando seu potencial como candidata vacinal.

Diagnóstico da esquistossomose mansoni em áreas de baixa transmissão: Avaliação de diferentes técnicas (Kato-Katz, Gradiente Salínico, PCR-ELISA e qPCR), antes e após intervenção terapêutica

Este estudo populacional foi realizado em duas localidades endêmicas para a esquistossomose, Tabuas e Estreito de Miralta, pertencentes ao município de Montes Claros, região norte de Minas Gerais, empregando-se duas técnicas parasitológicas e dois ensaios moleculares para o diagnóstico da esquistossomose mansoni. Uma amostra fecal foi obtida de todos participantes e examinada utilizando a técnica de Kato-Katz (24 lâminas = 1000 mg) e a técnica do Gradiente Salínico, utilizando duas porções de 500 mg, totalizando 1000 mg de fezes. Além disso, os ensaios de PCR-ELISA e qPCR foram realizados em DNA extraído de 1000 mg de fezes. Os resultados obtidos pelas diferentes técnicas foram analisados individualmente e comparativamente entre eles. Todos os indivíduos que apresentaram ovos de Schistosoma mansoni ou outros helmintos foram tratados com praziquantel ou albendazol, respectivamente. Para avaliação de cura após o tratamento, amostras de fezes dos indivíduos positivos para S. mansoni, foram coletadas 30, 90 e 180 dias após o tratamento, e examinadas pelas técnicas parasitológicas e pelos ensaios moleculares.

Na localidade de Tabuas, a taxa de positividade, obtida pelo exame de duas lâminas pela técnica de Kato-Katz, foi de 15,5% (23/148), pela análise de 24 lâminas de Kato-Katz 20,9% (31/148) e a obtida pela técnica do Gradiente Salínico foi de 29,0% (43/148) (p< 0,05). A prevalência obtida pela combinação dos resultados das duas técnicas parasitológicas foi de 31,0% (46/148). O ensaio de PCR-ELISA apresentou taxa de positividade de 25,0% (37/148) e ensaio de qPCR, 30,4% (45/148). Na localidade Estreito de Miralta, a taxa de positividade obtida pelo exame de duas lâminas pela técnica de Kato-Katz foi de 10,5% (15/142). As técnicas de Kato-Katz (24 lâminas) e do Gradiente Salínico revelaram taxas de positividade de 19,7% (28/142) e 18,3% (26/142) (p= 0,802), respectivamente. A prevalência obtida pela combinação dos resultados das técnicas parasitológicas foi de 24,6% (35/142). O ensaio de qPCR apresentou taxa de positividade de 18,3% (26/142). Na localidade de Tabuas, as taxas de cura obtidas pelas técnicas parasitológicas Kato-Katz e Gradiente Salínico, 30, 90 e 180 dias após o tratamento foram 100%, 91,6% e 78,4%, respectivamente. Pelo ensaio de PCR-ELISA as taxas de cura obtidas foram de 89,7%, 88,8% e 67,5% e pelo ensaio de qPCR, as taxas de cura foram 100%, 83,3% e 62,1%, nas mesmas etapas de acompanhamento. Na localidade de Estreito de Miralta, as taxas de cura obtidas pelas técnicas de Kato-Katz e GS foram 93,3%, 96,9% e 96,5% (30, 90 e 180 dias após o tratamento, respectivamente) e pelo ensaio de qPCR foram 93,3%, 93,9% e 96,5% nas mesmas etapas de acompanhamento. Este estudo reforça a necessidade de se combinar técnicas com o objetivo de melhorar a acurácia diagnóstica, aumentando a chance de detectar indivíduos com carga parasitária baixa, reduzindo assim a contribuição destes para a manutenção da transmissão

Aspectos adaptativos de Schistosoma mansoni na fase esquistossômulo: abordagem in vivo e in vitro

Dentre as formas evolutivas do Schistosoma mansoni, o esquistossômulo é uma das mais estudadas para desenvolvimento de novos fármacos e sistemas diagnósticos. Embora a transformação in vitro seja vantajosa, é importante discutir as limitações do uso de resultados obtidos a partir de parasitos cultivados in vitro em relação aos obtidos no processo natural de infecção. No presente trabalho, esquistossômulos obtidos in vivo e in vitro foram comparados em relação a capacidade de captar sondas fluorescentes, específicas para estruturas internas celulares ou membranas superficiais do parasito. As sondas empregadas para membranas e estruturas internas mostraram marcação similar entre parasitos obtidos in vitro, por transformação mecânica (Mec) e por penetração em pele (Pel). No entanto, diferenças foram observadas quando estes parasitos foram comparados a outros obtidos in vivo pelo método de Clegg (Clegg et al,1965), sendo detectado um aumento da permeabilidade de membranas.

Os dados sugerem que nos esquistossômulos cultivados in vivo o metabolismo é mais ativo nas células superficiais e que durante sua permanência por até 72 horas na pele há um extenso turnover da superfície do parasito, envolvendo moléculas internas e uma umento da liberação de imunógenos. A aumentada permeabilidade pode permitir ainda a captação de moléculas, capazes de estimular o crescimento do parasito. Além disso, bibliotecas de esquistossômulos Mec cultivados em soro portal (SPO3h eSPO12h) e soro periférico de hamster (SPE3h, SPE12h) foram comparadas utilizando sequenciamento de nova geração (NGS) e análise da expressão de genes específicos. Após o sequenciamento e análise dos genes expressos uma alta similaridade entre as réplicas foi encontrada. Comparando as amostras SPO3h versus SPO12h 58 transcritos se mostraram diferencialmente expressos. De acordo com as anotações de termos de ontologia gênica (GO) os genes diferencialmente expressos após 12 horas de contato com o soro portal de hamster, estão ligados a processos importantes ao desenvolvimento até vermes adultos. Assim, este estudo viabilizou um maior entendimento de mecanismos de controle sobre a internalização de moléculas pelo parasito no estádio larvário intravascular, bem como da regulação de sua expressão de genes quando o mesmo se encontra no sistema porta hepático do hospedeiro, onde as formas adultas são essenciais para desenvolvimento da doença

Aspectos adaptativos de Schistosoma mansoni na fase esquistossômulo: abordagem in vivo e in vitro / Adaptive aspects of Schistosoma mansoni in schistosomulum phase: in vivo and in vitro approach

Dentre as formas evolutivas do Schistosoma mansoni, o esquistossômulo é uma das mais estudadas para desenvolvimento de novos fármacos e sistemas diagnósticos. Embora a transformação in vitro seja vantajosa, é importante discutir as limitações do uso de resultados obtidos a partir de parasitos cultivados in vitro em relação aos obtidos no processo natural de infecção. No presente trabalho, esquistossômulos obtidos in vivo e in vitro foram comparados em relação a capacidade de captar sondas fluorescentes, específicas para estruturas internas celulares ou membranas superficiais do parasito. As sondas empregadas para membranas e estruturas internas mostraram marcação similar entre parasitos obtidos in vitro, por transformação mecânica (Mec) e por penetração em pele (Pel). No entanto, diferenças foram observadas quando estes parasitos foram comparados a outros obtidos in vivo pelo método de Clegg (Clegg et al,1965), sendo detectado um aumento da permeabilidade de membranas...

Os dados sugerem que nos esquistossômulos cultivados in vivo o metabolismo é mais ativo nas células superficiais e que durante sua permanência por até 72 horas na pele há um extenso turnover da superfície do parasito, envolvendo moléculas internas e uma umento da liberação de imunógenos. A aumentada permeabilidade pode permitir ainda a captação de moléculas, capazes de estimular o crescimento do parasito. Além disso, bibliotecas de esquistossômulos Mec cultivados em soro portal (SPO3h eSPO12h) e soro periférico de hamster (SPE3h, SPE12h) foram comparadas utilizando sequenciamento de nova geração (NGS) e análise da expressão de genes específicos. Após o sequenciamento e análise dos genes expressos uma alta similaridade entre as réplicas foi encontrada. Comparando as amostras SPO3h versus SPO12h 58 transcritos se mostraram diferencialmente expressos. De acordo com as anotações de termos de ontologia gênica (GO) os genes diferencialmente expressos após 12 horas de contato com o soro portal de hamster, estão ligados a processos importantes ao desenvolvimento até vermes adultos. Assim, este estudo viabilizou um maior entendimento de mecanismos de controle sobre a internalização de moléculas pelo parasito no estádio larvário intravascular, bem como da regulação de sua expressão de genes quando o mesmo se encontra no sistema porta hepático do hospedeiro, onde as formas adultas são essenciais para desenvolvimento da doença...

Avaliação da imunoproteção induzida pelas proteínas recombinantes Sm29 e Sm22.6 de Schistosoma mansoni em camundongos primoinfectados e tratados / Immunoprotection evaluation induced by recombinant proteins and Sm29 Sm22.6 of Schistosoma mansoni in mice and treated infectedprime

O desenvolvimento de uma vacina para a esquistossomose, juntamente com a quimioterapia, seria de grande impacto para o controle e eliminação da doença. Nesse sentido, vários antígenos do parasito já foram testados a fim de avaliar a capacidade dos mesmos em induzirem proteção contra a infecção pelo Schistosoma mansoni. Porém, apesar de alguns antígenos apresentarem bons resultados na proteção contra a infecção, esses nunca foram testados em modelos experimentais previamente expostos a antígenos do parasito. No caso da esquistossomose, isso seria importante já que os moradores de áreas endêmicas, população alvo de uma vacina para a doença, passam por repetidas infecções ao longo de suas vidas. Diante dessa necessidade, duas proteínas de tegumento de Schistosoma mansoni, Sm22.6 e Sm29, merecem destaque já que têm sido associadas à resistência à infecção e reinfeção em moradores de áreas endêmicas, e por terem induzido proteção parcial em ensaios envolvendo a imunização de camundongos C57BL/6 naïve. Portanto, este trabalho objetivou avaliar a habilidade das proteínas recombinantes, Sm22.6 e Sm29, em induzirem proteção em animais BALB/c que já tenham sido previamente infectados e tratados. Nós também avaliamos a capacidade das proteínas Sm22.6r e Sm29r em induzirem proteção em camundongos BALB/c naïve, já que nos trabalhos anteriores essas foram testadas em animais da linhagem C57BL/6...

Nossos resultados demonstraram que, diferentemente dos trabalhos anteriores, a imunização de animais BALB/c naïve com Sm22.6r ou Sm29r não foi capaz de induzir proteção. Apesar disso, através de um ensaio de imunofluorescência, foi possível observar que os anticorpos produzidos, em resposta à imunização com Sm22.6r ou Sm29r, foram capazes de reconhecer a forma nativa dessas proteínas, na superfície do parasito. A imunização de animais, infectados e tratados, com Sm22.6r+Freund, embora tenha desencadeado uma resposta imune robusta, também não foi capaz de conferir imunidade protetora. Por outro lado, camundongos, infectados/tratados, imunizados com Sm29r+Freund apresentaram significativa redução da carga parasitária (proteção de 26%-48%) após três doses da vacina. Esta formulação vacinal induziu uma produção significativa das citocinas IL-2, IFN-γ, IL-17 e IL-4; uma resposta humoral vigorosa com produção de IgG, IgG1, IgG2a e IgE específicos; e um aumento significativo no percentual de células TCD4+ de memória central. Os adjuvantes Alum e MPL também foram formulados juntamente com a Sm29r. Os resultados demonstraram que somente a formulação vacinal Sm29r+Alum foi capaz de conferir proteção (29%-37%), desencadeando uma produção significativa de IL-2, IL-17 e IL-10, e um aumento do percentual de células TCD4+ produtoras de IFN-γ. Além disso, esses animais apresentaram níveis significativos de anticorpos específicos IgG, IgG1, IgG2a e IgE e um aumento significativo no percentual de células B de memória. Nossos resultados confirmam o papel imunoprotetor da proteína Sm29r, reforçando seu potencial como candidata vacinal...

Diagnóstico da esquistossomose mansoni em áreas de baixa transmissão: Avaliação de diferentes técnicas (Kato-Katz, Gradiente Salínico, PCR-ELISA e qPCR), antes e após intervenção terapêutica / Diagnosis of schistosomiasis in areas of low transmission: Evaluation of different techniques (Kato-Katz, Salínico Gradient, PCR-ELISA and qPCR) before and after therapeutic intervention

Este estudo populacional foi realizado em duas localidades endêmicas para a esquistossomose, Tabuas e Estreito de Miralta, pertencentes ao município de Montes Claros, região norte de Minas Gerais, empregando-se duas técnicas parasitológicas e dois ensaios moleculares para o diagnóstico da esquistossomose mansoni. Uma amostra fecal foi obtida de todos participantes e examinada utilizando a técnica de Kato-Katz (24 lâminas = 1000 mg) e a técnica do Gradiente Salínico, utilizando duas porções de 500 mg, totalizando 1000 mg de fezes. Além disso, os ensaios de PCR-ELISA e qPCR foram realizados em DNA extraído de 1000 mg de fezes. Os resultados obtidos pelas diferentes técnicas foram analisados individualmente e comparativamente entre eles. Todos os indivíduos que apresentaram ovos de Schistosoma mansoni ou outros helmintos foram tratados com praziquantel ou albendazol, respectivamente. Para avaliação de cura após o tratamento, amostras de fezes dos indivíduos positivos para S. mansoni, foram coletadas 30, 90 e 180 dias após o tratamento, e examinadas pelas técnicas parasitológicas e pelos ensaios moleculares...

Caracterização da maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em Biomphalaria glabrata e o efeito da infecção por Schistosoma mansoni no processo / Characterization of miRNAs and piRNAs processing machinery in Biomphalaria glabrata and the effect of infection by Schistosoma mansoni in the process

A Organização Mundial de Saúde estima que cerca de 240 milhões de pessoas, em 78 países, necessitam de tratamento para esquistossomose, uma doença crônica causada por trematódeos do gênero Schistosoma. No Brasil, o Schistosoma mansoni é o único representante deste gênero, cuja passagem pelo hospedeiro invertebrado, caramujos do gênero Biomphalaria, é obrigatória antes de infectar um hospedeiro mamífero, entre eles o homem. A interação parasito-hospedeiro invertebrado é complexa, podendo o grau de susceptibilidade do caramujo à infecção variar desde extremamente permissivo até completamente resistente. Com o genoma e transcriptoma de B. glabrata disponíveis, o estudo de genes relacionados à regulação da expressão gênica, principalmente aqueles responsáveis pela maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs poderão auxiliar no entendimento da biologia do vetor B. glabrata bem como sua relação como o parasito S. mansoni. Alguns aspectos da interação parasito-hospedeiro invertebrado continuam pouco explorados, incluindo a participação dos pequenos RNAs não codificadores de proteínas como miRNAs, siRNAs e piRNAs. Utilizando ferramentas de bioinformática ePCR quantitativa, buscamos identificar e caracterizar a maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em B. glabrata...

Nosso trabalho demonstra que a maquinaria necessária para o processamento destas moléculas está ativa em B. glabrata com expressão gênica diferencial dos genes Argonauta, Drosha, Piwi, Exportina 5 e Tudor em diferentes estágios de desenvolvimento do animal bem como durante a infecção pelo S. mansoni. As análises de bioinformática utilizadas nesse trabalho mostraram a alta conservação dos genes envolvidos na maquinaria de miRNAs e piRNAs utilizando análise e distribuição de domínios conservados, análise de resíduos do sítio catalítico bem como análise filogenética. Estes dados sugerem que a maquinaria de silenciamento mediada por miRNAs e piRNAs interferem na biologia do caramujo durante todo o seu ciclo de vida, além de contribuir, de maneira ainda indefinida, na relação B. glabrata/S. mansoni. Estudos mais detalhados necessitarão ser realizados para confirmar a participação das preditas proteínas da via de miRNAs e piRNAs na relação parasito/hospedeiro, principalmente sua participação efetiva em seus genes alvos, uma vez que o parasito S. mansoni não possui expressa a via de piRNAs em seu genoma...

Análise da reinfecção pelo Schistosoma mansoni entre escolares com idade de 5 15 anos em área endêmica: Vale do Jequitinhonha, MG / The analyze of reinfection by Schistosoma mansoni in school children aged 5-15 years

A esquistossomose é uma das parasitoses mais prevalentes no mundo e é um grande problema de saúde pública, principalmente nos países em desenvolvimento. Atualmente a medida mais utilizada para o controle da doença é a quimioterapia. Entretanto, sabe-se que mesmo após o tratamento os indivíduos se reinfectam. Sabe-se também que há uma estreita relação entre os fatores demográficos, socioeconômicos e comportamentais na dinâmica da transmissão da esquistossomose. Diante disso, a realização deste estudo teve como objetivo analisar a reinfecção pelo Schistosoma mansoni entre escolares com idade de 5 a 15 anos. Os participantes foram 407 crianças e adolescentes infectados pelo S. mansoni e residentes no município de Ponto dos Volantes, nas comunidades de Palha, Astraluta, Caju (Jequitinhonha) e Córrego São João (Itaobim), sendo todas essas áreas consideradas endêmicas para a esquistossomose. No início do estudo, todos os voluntários foram tratados com Praziquantel e responderam aos questionários socioeconômico e de contato com a água. Foram coletadas, também, as coordenadas geográficas das suas residências. Um ano após o tratamento foram realizados exames parasitológicos de fezes de todos os escolares para avaliar a reinfecção tendo sido encontrada uma taxa de 21,6 %. O modelo multivariado mostrou que a carga parasitária pré-tratamento (p < 0,001) e a falta de fornecimento de água tratada (p = 0,010) mantiveram-se associadas à reinfecção. Aqueles que reinfectaram tiveram um maior contato com água potencialmente contaminada apesar da diferença não ter sido significativa. A análise espacial apontou que, em todas as áreas estudadas, a reinfecção ocorreu de forma heterogênea. Concluiu-se que a taxa de reinfecção pelo S. mansoni é preocupante e que possuir uma alta carga parasitária antes do tratamento e residir em local onde não há água tratada foram os principais fatores de risco para a reinfecção pelo S. mansoni.

Schistosomiasis is one of the most prevalent parasitic diseases in the world and is a major public health problem, particularly in developing countries. Currently the most commonly used measure for controlling the condition is chemotherapy. However, after the treatment, the individuals become infected again. It is well known that there is a close relationship between demographic, socioeconomic and behavioral factors in the dynamics of schistosomias is transmission. Therefore, this study aimed to analyze reinfection by Schistosoma mansoni in school children aged 5-15 years. Participants were 407 children and adolescents infected with S. mansoni and residents in the municipality of Ponto dos Volantes, and the communities of Palha, Astraluta, Caju and Córrego São João, all of which are endemic areas for schistosomiasis. At baseline, all subjects were treated with Praziquantel, responded to socioeconomic and water contact questionnaires. The geographical coordinates of all houses were collected. One year after the treatment another faecal exam was performed to evaluate reinfection rates. The results showed a reinfection rate of 21.6%. The multivariate model showed that parasite load before treatment (p < 0.001) and lack of treated water supply (p = 0.010) remained associated to reinfection. Spatial analys is showed that in all areas studied reinfection occurred heterogeneously. It is concluded that the reinfection rate is worrisome and having high intensity of infection before treatment and leaving in areas with no treated water were considered the main risk factors to re-infection with S. mansoni.

Estudo da resistência do Schistosoma mansoni Sambon, 1907 ao praziquantel

Atualmente, a droga utilizada no tratamento da esquistossomose é o praziquantel (PZQ). Alguns casos de isolados de S. mansoni resistentes ao PZQ no campo e em laboratório já foram relatados. Estes relatos refletem uma parcela ínfima do problema real, devido às dificuldades para a comprovação dessa resistência em condições de laboratório. Recentemente, nosso grupo conseguiu induzir resistência,em laboratório, a uma cepa de S. mansoni, utilizando sucessivos tratamentos com PZQ em B. glabrata infectadas com o S. mansoni (cepa LE-PZQ). Diante disso, este trabalho teve como objetivo geral avaliar a resistência/ suscetibilidade da cepa LEPZQ ao longo de seu desenvolvimento no hospedeiro vertebrado bem como avaliara ação do PZQ em cercárias sensíveis e resistentes ao PZQ a fim obter um teste rápido para detecção de resistência e, por fim, estudar o envolvimento das proteínas SMDR2, SmMRP1 e SmMVP na resistência do S. mansoni ao PZQ. Para isso,camundongos infectados com a cepa LE-PZQ ou com a cepa suscetível (LE) foram tratados com PZQ após 2, 6, 16, 23 e 45 dias de infecção.

Os resultados mostraram maior recuperação de vermes da cepa resistente tratadas com PZQ após 16 e 23 dias de infecção em comparação com a cepa LE. Outro objetivo do nosso estudo foi avaliar a perda da cauda de cercárias LE e LE-PZQ após 1 e 2 horas de contato com o PZQ em diferentes concentrações. Cercárias LE-PZQ apresentaram uma perda da cauda estatisticamente menor após exposição nas diferentes concentrações de PZQ por 1 ou 2 horas. Artigos sobre resistência à multidrogas(MDR) têm sido importantes para estudo de resistência em diversos organismos. Por isso, investigamos os níveis de RNA de SMDR2 e SMRP1 por qRT-PCR. SMDR2 mostrou níveis maiores em fêmeas quando comparados com machos e vermes empares na cepa LE. Na cepa LE-PZQ, vermes fêmeas apresentaram níveis maiores quando comparados apenas com vermes machos. Quando comparadas as duas cepas, a resistente apresentou níveis estatisticamente maiores em machos, fêmea se vermes em pares. SmMRP1 demonstrou expressão significativamente maior em machos e machos e fêmeas nas duas cepas quando comparados com fêmeas. Na comparação entre a cepa sensível e a resistente, a LE-PZQ apresentou maiores níveis de expressão em machos e vermes em pares. Investigamos também os níveis de RNA e proteínas de SmMVP. Foi possível observar que SmMVP está diferencialmente expressa entre machos, fêmeas e vermes em pares quando comparados entre si em cada cepa e quando compara-se cepa sensível e resistente.

Estudo da resistência do Schistosoma mansoni Sambon, 1907 ao praziquantel / Study of resistance of Schistosoma mansoni Sambon, 1907 to praziquantel

Atualmente, a droga utilizada no tratamento da esquistossomose é o praziquantel (PZQ). Alguns casos de isolados de S. mansoni resistentes ao PZQ no campo e em laboratório já foram relatados. Estes relatos refletem uma parcela ínfima do problema real, devido às dificuldades para a comprovação dessa resistência em condições de laboratório. Recentemente, nosso grupo conseguiu induzir resistência,em laboratório, a uma cepa de S. mansoni, utilizando sucessivos tratamentos com PZQ em B. glabrata infectadas com o S. mansoni (cepa LE-PZQ). Diante disso, este trabalho teve como objetivo geral avaliar a resistência/ suscetibilidade da cepa LEPZQ ao longo de seu desenvolvimento no hospedeiro vertebrado bem como avaliara ação do PZQ em cercárias sensíveis e resistentes ao PZQ a fim obter um teste rápido para detecção de resistência e, por fim, estudar o envolvimento das proteínas SMDR2, SmMRP1 e SmMVP na resistência do S. mansoni ao PZQ. Para isso,camundongos infectados com a cepa LE-PZQ ou com a cepa suscetível (LE) foram tratados com PZQ após 2, 6, 16, 23 e 45 dias de infecção...

Os resultados mostraram maior recuperação de vermes da cepa resistente tratadas com PZQ após 16 e 23 dias de infecção em comparação com a cepa LE. Outro objetivo do nosso estudo foi avaliar a perda da cauda de cercárias LE e LE-PZQ após 1 e 2 horas de contato com o PZQ em diferentes concentrações. Cercárias LE-PZQ apresentaram uma perda da cauda estatisticamente menor após exposição nas diferentes concentrações de PZQ por 1 ou 2 horas. Artigos sobre resistência à multidrogas(MDR) têm sido importantes para estudo de resistência em diversos organismos. Por isso, investigamos os níveis de RNA de SMDR2 e SMRP1 por qRT-PCR. SMDR2 mostrou níveis maiores em fêmeas quando comparados com machos e vermes empares na cepa LE. Na cepa LE-PZQ, vermes fêmeas apresentaram níveis maiores quando comparados apenas com vermes machos. Quando comparadas as duas cepas, a resistente apresentou níveis estatisticamente maiores em machos, fêmea se vermes em pares. SmMRP1 demonstrou expressão significativamente maior em machos e machos e fêmeas nas duas cepas quando comparados com fêmeas. Na comparação entre a cepa sensível e a resistente, a LE-PZQ apresentou maiores níveis de expressão em machos e vermes em pares. Investigamos também os níveis de RNA e proteínas de SmMVP. Foi possível observar que SmMVP está diferencialmente expressa entre machos, fêmeas e vermes em pares quando comparados entre si em cada cepa e quando compara-se cepa sensível e resistente...

A qualidade da informação nos ciclos biológicos de Schistosoma mansoni veiculados na rede mundial de computadores- Internet / Quality of information about biological cycles of Schistosoma mansoni broadcasted on the world wide web – internet

A internet está em expansão na educação, principalmente nas áreas de divulgação, pesquisa e ensino. Por isso, neste trabalho foi avaliada a qualidade da informação nos ciclos de Schistosomamansoni veiculados na internet. Como metodologia foi utilizado o método de busca Google Imagens, por meio do qual foram encontrados 45 diferentes ciclos. Observou-se que há falta de referência de informação de fontes seguras na elaboração destes ciclos, uma vez que os equívocos foram insistentemente repetidos. Com frequência foi utilizada uma imagem do molusco de forma estereotipada ou minimizada, o que leva a representações equivocadas e pedagogicamente inadequadas, impossibilitando o usuário de reconhecer o molusco no ambiente e, consequentemente, expondo-o ao risco de infecção.

Estudo funcional da proteína quinase JNK de Schistosoma mansoniatravés de expressão heteróloga no organismo modelo Caenorhabditis elegans

A identificação e caracterização dos mecanismos e moléculas envolvidos em sinalização celular são essenciais para o entendimento da biologia parasitária do S. mansoni. Proteína quinases desempenham papel chave em vias de sinalização e tem sido propostas como potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas anti-Schistosoma. Visto que a caracterização funcional em S. mansoni é dificultada por limitações nos métodos de transformação genética deste parasito, o presente estudo propõe o uso de C. elegans como um modelo para a expressão heteróloga de genes de S. mansoni que codificam proteínas quinases. Genes que codificam proteína quinase sem S. mansoni,homólogos aos identificados em C. elegans, foram selecionados pelo nosso grupo a partir do proteoma do parasito através de uma abordagem filogenômica. Inicialmente, foi selecionada a proteína quinase JNK, que participa da via de sinalização das MAP quinases para a realização das análises experimentais. Em C. elegans, a proteína JNK está relacionada ao aumento de longevidade e da resistência aos estresses térmico e oxidativo.

Oligonucleotídeos específicos foram desenhados paraamplificar a região promotora do gene emC. elegansbem como as regiões codificantes(CDS) em ambos os organismos. A região promotora foi amplificada a partir do DNAgenômico extraído deC. elegansadultos. O RNA total foi extraído de esquistossômuloseC. elegansadultos. As CDS foram amplificadas a partir do cDNA sintetizado e osfragmentos de DNA resultantes foram clonados emE. coliDH5α. As construçõesobtidas foram digeridas com enzimas de restrição selecionadas de forma a linearizar ovetor contendo a região promotora e recuperar as CDS. Posteriormente, foramrealizadas subclonagens através da ligação das CDS deC. eleganseS. mansonicom aconstrução contendo a região promotora.C. elegansN2 receberam as construçõesfinais através de microinjeção. Foram obtidas três linhagens que expressam Ce_JNK-1,denominadas N2Ex01[Ce_jnk-1], N2Ex02[Ce_jnk-1]e N2Ex03[Ce_jnk-1]e duaslinhagens expressando Sm_JNK, denominadas N2Ex04[Sm_jnk]e N2Ex05[Sm_jnk].Os níveis de expressão de Sm_JNK e Ce_JNK-1 nas linhagens transgênicas foramavaliados por RT-PCR quantitativo. Apesar do aumento da expressão de JNKobservado nas linhagens transgênicas, não houve aumento na longevidade dasmesmas. Embora esta seja a primeira utilização de expressão heteróloga emC. eleganspara investigar a função de genes deS. mansoni, esta técnica tem sido utilizada comsucesso para nematóides parasitos e pode tornar-se uma abordagem alternativa para osestudos funcionais em outros parasitos

Avaliação do polimorfismo genético de TLR9 em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico / Evaluation of genetic polymorphism of TLR9 in systemic lupus erythematosus

Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença autoimune sistêmica na qual a principal alteração está relacionada à ativação policlonal de linfócitos B com a produção de uma ampla variedade de autoanticorpos dirigidos contra componentes nucleares, citoplasmáticos, de superfície celular e moléculas solúveis do plasma. Fatores genéticos têm sido implicados na patogênese dessa patologia. TolI-like receptor 9 (TLR9) é um importante componente do sistema imune inato que reconhece sequências não metiladas CpG de DNA...

Estudo funcional da proteína quinase JNK de Schistosoma mansoniatravés de expressão heteróloga no organismo modelo Caenorhabditis elegans / Functional studies of the protein kinase JNK Schistosoma mansoni by heterologous expression in the model organism C. elegans

A identificação e caracterização dos mecanismos e moléculas envolvidos em sinalização celular são essenciais para o entendimento da biologia parasitária do S. mansoni. Proteína quinases desempenham papel chave em vias de sinalização e tem sido propostas como potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas anti-Schistosoma. Visto que a caracterização funcional em S. mansoni é dificultada por limitações nos métodos de transformação genética deste parasito, o presente estudo propõe o uso de C. elegans como um modelo para a expressão heteróloga de genes de S. mansoni que codificam proteínas quinases. Genes que codificam proteína quinase sem S. mansoni,homólogos aos identificados em C. elegans, foram selecionados pelo nosso grupo a partir do proteoma do parasito através de uma abordagem filogenômica. Inicialmente, foi selecionada a proteína quinase JNK, que participa da via de sinalização das MAP quinases para a realização das análises experimentais. Em C. elegans, a proteína JNK está relacionada ao aumento de longevidade e da resistência aos estresses térmico e oxidativo. Oligonucleotídeos específicos foram desenhados paraamplificar a região promotora do gene emC. elegansbem como as regiões codificantes(CDS) em ambos os organismos. A região promotora foi amplificada a partir do DNAgenômico extraído deC. elegansadultos. O RNA total foi extraído de esquistossômuloseC. elegansadultos. As CDS foram amplificadas a partir do cDNA sintetizado e osfragmentos de DNA resultantes foram clonados emE. coliDH5α. As construçõesobtidas foram digeridas com enzimas de restrição selecionadas de forma a linearizar ovetor contendo a região promotora e recuperar as CDS. Posteriormente, foramrealizadas subclonagens através da ligação das CDS deC. eleganseS. mansonicom aconstrução contendo a região promotora.C. elegansN2 receberam as construçõesfinais através de microinjeção. Foram obtidas três linhagens que expressam Ce_JNK-1,denominadas N2Ex01[Ce_jnk-1], N2Ex02[Ce_jnk-1]e N2Ex03[Ce_jnk-1]e duaslinhagens expressando Sm_JNK, denominadas N2Ex04[Sm_jnk]e N2Ex05[Sm_jnk].Os níveis de expressão de Sm_JNK e Ce_JNK-1 nas linhagens transgênicas foramavaliados por RT-PCR quantitativo. Apesar do aumento da expressão de JNKobservado nas linhagens transgênicas, não houve aumento na longevidade dasmesmas. Embora esta seja a primeira utilização de expressão heteróloga emC. eleganspara investigar a função de genes deS. mansoni, esta técnica tem sido utilizada comsucesso para nematóides parasitos e pode tornar-se uma abordagem alternativa para osestudos funcionais em outros parasitos.

Diseño, síntesis y evaluación biológica de un grupo de pirazinoisoquinolinas y quinolinas con posible actividad esquistosomicida y leishmanicida respectivamente / Design, synthesis and biological evaluation of a group of pyrazinoisoquinolines and quinolines with possible schistosomicidal and leishmanicidal activity respectively

La esquistosomiasis y la leishmaniasis son dos parasitosis con una alta incidencia en el mundo y con la menor cantidad de medicamentos disponibles para sus tratamientos. Para la esquistosomiasis, el praziquantel (PZQ) es la única droga que existe en los actuales momentos contra la enfermedad, mientras que, en el caso de la leishmaniasis, los antimoniales pentavalentes, empleados como drogas de primera línea, son altamente tóxicos o presentan problemas de resistencia. Por ello, esta tesis describe el diseño, la síntesis y los estudios de actividad biológica de un grupo de pirazinoisoquinolinas y quinolinas sustituidas con posible actividad esquistosomicida y leishmanicida respectivamente. Luego de ensayar diversas vías, se logró la síntesis del PZQ y compuestos relacionados (quince compuestos) mediante una secuencia de cinco pasos, con rendimientos entre el 20% y el 60%. El PZQ se obtuvo en un 33%, con un exceso del enantiómero levo, mostrando ser más activo que el PZQ comercial (mezcla racémica). Los compuestos obtenidos, evaluados en cepas de S. mansoni, no mostraron ser más activos que el PZQ, a las dos concentraciones evaluadas. También, se cuantificó la relación entre la estructura química y la actividad biológica (QSAR) de derivados de PZQ reportados en la literatura. En cuanto a los compuestos con posible actividad leishmanicida, también se ensayaron varios métodos de síntesis hasta lograr obtener veintidós quinolínas de los tipos 2-metil, 2-propil, 4-metil-2-propil y 2-alquildiamino con rendimientos entre un 10 y un 70%. Los compuestos evaluados que mostraron una actividad prometedora en promastigotes de L. mexicanafueron la 2-metilquinolina y 6,7-metilendioxi-2-propil-quinolina. En cuanto a los estudios QSAR, no fue posible encontrar una ecuación representativa que relacionara la actividad biológica con la estructura química.

Schistosomiasis and leishmaniasis are two parasitic diseaseswell spread in the world, and at the same time both have very few medications for their treatment. For schistosomiasis, praziquantel (PZQ) is the drug of choice for its treatment, while in the case of leishmaniasis, the pentavalent antimonials used as first line drugs are highly toxic or present resistance problems. This work describes the design, synthesis and biological activity studies of a group of pirazinoisoquinolines and substituted quinolines with a possible schistosomicidal and leishmanicidal activities, respectively. After several intents, it was possible to synthesize PZQ and some related compounds (fifteen) through a sequence of five steps, with yields between 20 and 60%. PZQ was obtained with a yield of 33%, with a levoenantiomeric excess, and showed a better activity than the commercial compound. The related compounds obtained, evaluated against S. mansonistrains did not have an activity comparable to that of PZQ, at the concentrations evaluated. Quantitative structure­activity relationships (QSAR)studieswere also performed with PZQ derivatives reported in the literature.Several ways of synthesis were also probed for the possible leishmanicidal compounds proposed, until it was possible to obtain twenty two quinoline derivatives (of the type 2-methyl-, 2-propyl-, 4-methyl-2-propyl-and 2-alquildiamino-), with yields between10 and 70%. Of the compounds evaluated, two showed promising activity against L. mexicana promastigotes, 2-iimethylquinoline and 6,7-methylendioxi-2-propyl-quinoline. QSAR studies with these compounds did not yield a representative model for the set.

Dermatite cercariana por esquistossomatídeos de aves: é possível a ocorrência de casos no Brasil? / Swimmers’ itch by avian schistosomes: is it possible in Brazil?

A dermatite cercariana causada por larvas de esquistossomatídeos de aves tem sido considerada uma enfermidade emergente. Embora ainda não haja relato de casos no Brasil, algumas espécies destes trematódeos já foram encontradas em aves e os potenciais hospedeiros intermediários (moluscos) estão amplamente distribuídos pelo país. Em razão da dificuldade de diagnósticoclínico diferencial da dermatite causada por larvas de Schistosoma mansoni, é possível que outras dermatites cercarianas sejam negligenciadas em nosso meio. Neste trabalho são discutidos aspectos relacionados à identificação de áreas de risco, à pesquisa de formas larvares em moluscos aquáticos, às alterações clínicas verificadas em humanos, ao tratamento e à profilaxia desta enfermidade. Concluiu-se que são necessários esforços para o diagnóstico da dermatite cercariana por outrosesquistossomatídeos e também que sejam desenvolvidos estudos visando ampliar o conhecimento sobre a ocorrência destes parasitos no Brasil.